Chromatographie sur couche mince
(CCM)
Verser l'éluant jusqu'à 1cm de hauteur environ
au fond d'un grand bécher contre la paroi duquel on aura placé
verticalement un papier filtre trempant dans l'éluant. Couvrir.
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Préparation de la plaque :
Tracer au crayon à papier sans appuyer une
ligne à un peu plus de 1cm du bas de la plaque (pourquoi)
. Marquer légèrement au crayon sur cette ligne (ligne
de dépôt) le ou les emplacements où l'on déposera
les solutions à analyser. Les emplacements doivent être distants
d'environ 1cm, et à au moins 1cm des bords.
A l'aide d'une pipette pasteur, d'un bâtonnet de bois
ou d'un tube capillaire, prélever une toute petite quantité
de solution à analyser. Déposer une goutte sur la
plaque à l'emplacement marqué. Laisser sécher la plaque
avant le développement. Si la solution est trop diluée, on
peut faire plusieurs dépôts au même emplacement , à
condition de bien sécher la plaque entre deux gouttes.
Attention : ne pas utiliser le même instrument pour
déposer des solutions différentes, ou bien le rincer plusieurs
fois avec un solvant organique volatil entre chaque solution (valable pour
pipette ou capillaire) .
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Développement du
chromatogramme :
Lorsque les dépôts sont secs, placer la plaque
le plus verticalement possible dans la cuve, contre la paroi, ligne de
dépôt vers le bas. La surface de l'éluant doit être
en
dessous de cette ligne. Couvrir. Surveiller la plaque régulièrement
: quand l'éluant est à environ 1cm du bord supérieur,
sortir la plaque, marquer immédiatement le niveau atteint par le
solvant au crayon à papier, sécher la plaque.
Si les taches sont incolores, on les fera apparaître
sous une lampe UV ou à l'aide d'un révélateur chimique. |
Chromatographie sur microcolonne
(pipette pasteur)
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Préparation
de la microcolonne :
Préparer,
en roulant un petit morceau de coton entre les doigts, une petite mèche
de 2-3mm de diamètre longue de 1,5 à 2 cm. L'introduire (par
la partie large !) dans une pipette pasteur propre et sèche, secouer
pour qu'elle vienne se loger en haut de la partie effilée de la
pipette.
Maintenir la pipette pasteur verticalement par exemple
à l'aide d'une pince en bois fixée à une potence (voir
figure).
La remplir de poudre de silice sans dépasser le
niveau du rétrécissement. Un morceau de papier filtre roulé
en cornet peut servir d'entonnoir. Attention, il suffit de très
peu de poudre de silice pour remplir la pipette. Tapoter les côtés
pour tasser la silice. Placer un récipient sous la pipette.
Remarque : lors d'une chromatographie classique, sur
une colonne munie d'un robinet à la base on imprègne
la colonne d'éluant jusqu'en haut avant de déposer l'échantillon.
Cette étape peut être omise pour une microcolonne sur pipette
pasteur, surtout lorsque l'éluant est très volatil : le haut
de la colonne se retrouve de toute manière très rapidement
à sec.
A l'aide d'une pipette pasteur, prélever un peu de
solution à chromatographier et la déposer sur le dessus de
la colonne de silice, qu'elle doit imprégner sur 3-4mm de hauteur.
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Développement de la
colonne (élution):
Lorsque le dépôt a bien imprégné
la silice, verser un peu d'éluant sur la colonne, très
doucement, pour ne pas déplacer la silice. Ajouter régulièrement
de l'éluant dans la colonne : le niveau d'éluant dans la
pipette doit rester au dessus de celui de la silice jusqu'à la fin
du développement
Changer très fréquemment le récipient
sous la pipette : en traversant la pipette, l'éluant entraîne
les composants du mélange les uns après les autres. |